石榴皮多酚超高压提取物的纯化_分离及功能性研究_严陇兵

发布于:2021-10-14 08:46:23

Science and Technology of Food Industry

研究与探讨

石榴皮多酚超高压提取物的纯化、分离 及功能性研究

严陇兵,刘邻渭*,林静雅,徐云凤 (西北农林科技大学食品科学与工程学院,陕西杨凌 712100)

摘 要:为探明超高压提取石榴皮多酚的组分和功能特性,研究了石榴皮多酚超高压提取物的大孔树脂纯化和有机 溶剂分级萃取,并对提取物、纯化物和分级产物的体外抗氧化活性和抑菌性能进行了测定。 结果表明:大孔树脂纯化 物 的总 酚 含 量高 达77.40%,且 抗氧 化 活 性和 抑 菌 性能 均 有 显著 提 高 ;HPLC测定 结 果 显示 ,大 孔 树 脂 纯 化 未 改 变 多 酚 种 类 ;有 机 溶 剂 分 级 萃 取 法 能 有 效 地 将 纯 化 物 进 一 步 分 离 ,其 中 正 丁 醇 相 的 萃 取 得 率 达 到55.28%;不 同 萃 取 相 产 物 的 总 酚 含 量 大 小 顺 序 为 :正 丁 醇 相>乙 酸 乙 酯 相>水 相 ,它 们 的 抗 氧 化 活 性 强 弱 顺 序 为 :乙 酸 乙 酯 相>正 丁 醇 相>水 相 ; 正丁醇相产物的抑菌活性最高,显著高于水相和乙酸乙酯相。 关键词:石榴皮多酚,超高压,抗氧化,抑菌

Study on the purification,separation and functions of polyphenol extractions by ultrahigh pressure from pomegranate peel
YAN Long-bing,LIU Lin-wei*,LIN Jing-ya,XU Yun-feng (College of Food Science and Engineering,Northwest Agriculture and Forestry University,Yangling 712100,China)

Abstract:To ascertain the antioxidative and antimicrobial activities of polyphenol extracted by the ultrahigh

pressure processing (UHPP) from pomegranate peel,based on purification by macroporous absorbent resin

and separation by organic solvents,extracts and samples with different purity quotients and polarities were

obtained and studied. The result showed that total polyphenol content of purification product was 77.40% ,and

the antioxidative and antimicrobial activities were improved significantly,HPLC showed that the types of

polyphenol compounds were not changed after purification,the purification sample had been successfully

separated by organic solvent,the yield of n -butanol phase attained to 55.28% ,the sequence of total

polyphenol contents in different extraction phases from highest to lowest was n-butanol phase >ethyl acetate

phase >water phase,the sequence of antioxidative activity was ethyl acetate phase >n -butanol phase >water

phase,the n-butanol phase had the highest antimicrobial activity which was significantly higher than water and

ethyl acetate phase.

Key words:polyphenols from pomegranate peel;ultrahigh pressure;antioxidative activity;antimicrobial activity

中 图 分 类 号 :TS209

文 献 标 识 码 :A

文 章 编 号:1002-0306(2012)22-0168-05

石榴(Punica Granatum L.)又名安石榴、丹若、甘 石榴、金罂等[1],是一种我国资源丰富[2],多酚含量较 高的水果。现代研究表明石榴多酚具有良好的抗氧 化、降血脂、抗菌和驱虫功能,可以防治多种癌症、心 血管疾病、老年痴呆、结肠癌等疾病[3-4],也可以治疗 消化系统疾病,促进胃肠蠕动,还可对生殖系统疾病 以及糖尿病产生很好的疗效。由于石榴多酚主要存 在于石榴皮中[5],且石榴皮在鲜果中的比重较大[6],又 经常作为下脚料而弃掉,所以开发石榴皮多酚具有 重要意义。研究表明,石榴皮多酚的生物活性与多酚 的纯度及极性显著相关,而不同提取、分离和纯化方
收稿日期:2012-05-16 * 通讯联系人 作者简介:严 陇 兵 (1985-),男 ,硕 士 研 究 生 ,主 要 从 事 食 品 化 学 与 营
养方面的研究。
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法可能会对多酚的成分和生理功能造成影响。超高 压(ultrahigh pressure processing,UHPP)与目前已报 道的溶剂提取[7]、超声波辅助提取[8]以及微波辅助提 取[9]相比具有提取时间短、有效成分 得率高[10]的优 点;大孔树脂纯化[11]和有机溶剂分级萃取[12]是常见的 纯化分离多酚的方法。因此,在研究超高压[13]提取石 榴皮多酚工艺的基础上,又深入研究了提取物的大 孔树脂纯化、溶剂分级及产物的体外抗氧化和抑菌 活性,旨在为进一步研究石榴皮多酚超高压提取分 离物的体内生理功能奠定坚实基础,并为其产业化 应用提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
实验材料 2010年9月下旬采摘陕西省临潼区 主栽品种净皮甜石榴,当天运回实验室,除去病果和

研究与探讨

Vol . 33 , No . 22 , 2012

裂果,洗净,手工取皮并置于50℃下恒温烘干,粉碎 后过80目筛,粉末置于密封袋中避光备用;HZ818大 孔吸附树脂 西安蓝深化工有限公司;没食子酸标 准品 国药集团化学试剂有限公司;Folin-Ciocalteu 试剂 上海喜润化学工业有限公司;Na2CO3、95%乙 醇、乙酸乙酯、正丁醇、DPPH·(二苯代苦味酰基自由 基,1,1-dipheny,1,1-picrylhydrazyl)(AR);抗坏血酸 (VC) 天津市博迪化工有限公司;无水乙醇、结晶紫、 H2O2、FeSO4等 均为国产分析纯;pH4.0磷酸氢二钠柠檬酸缓冲液 均使用国产试剂按要求配制而得; 多酚标品(安石榴苷、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸、鞣花 酸) 均购自沃尔森公司;儿茶素 四川维克奇生物 科技有限公司;原儿茶酸 天津一方科技有限公司。
UHPF-750MPa型超高压食品处理装置 包头 新发新型高技术食品机械有限公司;721型可见分光 光度计 上海光谱仪器有限公司;JA2003电子天* 上海舜宇恒*科学仪器有限公司;RE-52AA旋转蒸 发仪 上海亚荣生化仪器公司;LGJ-25C型冷冻干 燥 机 北 京 四 环 科 学 仪 器 有 限 公 司 ;SHIMADZU LC-15C高效液相色谱仪 配有250×4.6mm,5μm色 谱 柱 ,LC -10ATVP 二 元 梯 度 泵 ,SIL -10AF 自 动 进 样 器,SPD-10AVPA检测器,CBM-20A系统控制器以及 HT-220A柱温箱。
1.2 实验方法
1.2.1 石榴皮多酚的超高压提取方法 采取我们前 期研究确定的最优提取工艺[10],即提取压力582.7MPa, 保压时间2.3min,料液比1∶41,乙醇浓度52.8%,提取 两次。将得到的提取液在50℃下旋转蒸发进行浓缩, 然后冷冻干燥24h,得到干燥粗提取物粉末,并测定 总酚含量。 1.2.2 样品总酚含量的测定 采用Folin-Ciocalteu 比色法[14],以没食子酸当量(mg/mL)表示。 1.2.3 大孔树脂纯化 参考唐丽丽[12]的最佳工艺条 件 ,即 :使 用 HZ818 大 孔 树 脂 ,配 制 粗 提 物 浓 度 为 2.5mg/mL,用5% HCl和5% NaOH调节pH为3,以5BV/h 的流速上样,用浓度为70%的乙醇进行洗脱,其解吸 液流速为2BV/h,收集洗脱后颜色较深的部分,旋转 蒸发后,冷冻干燥,得到大孔树脂纯化物,冷冻干燥 后测定总酚含量。 1.2.4 HPLC组分测定 1.2.4.1 标准样品的配制 将没食子酸、安石榴苷、 原儿茶酸、儿茶素、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸、鞣花酸 标准品配制成浓度为1mg/mL的储备液,分别吸取安 石榴苷储备液1mL、原儿茶酸、儿茶素、绿原酸、鞣花 酸储备液各400μL,没食子酸、咖啡酸、阿魏酸储备液 各 200μL 混 合 均 匀 ,并 用 甲 醇 定 容 至 10mL ,按 照 1.2.4.3色谱条件进行液相测定,获得各组分的保留时 间与标准图谱。 1.2.4.2 样品溶液的测定 准确称取超高压粗提物 20.00mg和纯化物6.000mg,分别用甲醇溶解,并分别 定 容 至 10mL,用 0.45μm 的 针 头 过 滤 器 过 滤 后 ,按 照 1.2.4.3色谱条件进行测定。通过各组分的保留时间 与标准图谱的对比对其进行定性分析,利用外标法

进行定量分析。 1.2.4.3 色谱条件和洗脱程序 柱温:30℃,流速: 0.8mL/min,进样体积:20μL,检测波长:280nm,流动 相A:水:醋酸(97:3);流动相B:甲醇。
梯 度 洗 脱 程 序 :0 ~25min,B 为 5% ~30% ;25 ~ 50min,B为30%~50%;50~55min,B为50%~80%;55~ 60min,B为80%~100%,60~70min,B为100%~5%;70~ 80min维持在5%。 1.2.5 有机溶剂萃取分离 称取1g大孔树脂纯化物 的粉末,加入30mL蒸馏水充分混匀,调节pH到6.5,用 相同体积的乙酸乙酯萃取三次,收集乙酸乙酯相,再 调节pH到2.5,用同体积的乙酸乙酯萃取三次,收集 乙酸乙酯相;再加入相同体积的正丁醇萃取三次,收 集正丁醇相;得到了水相、正丁醇相以及乙酸乙酯相, 分别浓缩后,冷冻干燥,测定萃取得率和各组分总酚 含量。 1.2.6 不同提取物体外抗氧化活性测定 1.2.6.1 清除DPPH·能力的测定 参考Tsai S Y[15]和 何 永 艳 等 [16]的 方 法 ,计 算 不 同 样 品 浓 度 为 10mg/L 时 对DPPH·的清除率。并配制不同浓度的VC标准溶液, 绘制VC对DPPH清除率的标准曲 线,最终结果 以VC (mg/L)等量抗氧化能力(VC eqval antioxidant capacity, VCEAC)表示。 1.2.6.2 清除羟自由基能力的测定 采用结晶紫法。 参考李荣等[17]的方法,计算不同样品浓度为200mg/L 时对羟自由基的清除率,并配制不同浓度的VC标准 溶液,绘制VC对羟自由基清除率的标准曲线,最终结 果以VCEAC表示。 1.2.7 抑菌活性测定 1.2.7.1 抑菌圈直径的测定 用滤纸片法测定,即将 已灭菌好的LB琼脂培养基在无菌条件下倒入*板, 每 个 * 板 大 约 25mL,待 琼 脂 凝 固 后 ,用 移 液 抢 取 制备好的金黄色葡萄球菌菌 悬液(菌液浓 度为 1× 108CFU/mL)200μL,均匀涂布。将预先制备好的滤纸 片(滤纸片先用含有浓度为2.5mg/mL的不同石榴皮 多酚样品浸泡10min,然后烘干)用无菌镊子贴入染 菌*板,以无菌水浸泡并干燥的滤纸片做空白对照, 每种样品重复三次。将*板倒置在生化培养箱中于 37℃下培养24h后,用游标卡尺采用十字交叉法测量 抑菌圈直径,最终结果采用*均值±标准偏差表示。 1.2.7.2 最小抑菌浓度(MIC)的测定 对不同石榴 皮多酚样品采用倍数稀释法,稀释成10、5、2.5、1.25、 0.625、0.3125、0.156mg/mL 的 多 酚 浓 度 ,分 别 将 这 些 溶液各加入到一份灭菌好的培养基中,使得加入的 溶液在培养基中达到100μL/mL,然后分别将这些加 酚 培 养 基 20mL 倒 入 一 个 * 皿 中 ,待 其 凝 固 后 ,在 每 一*皿中加入200μL菌悬液,涂布均匀,同时用200μL 生理盐水涂布到灭菌培养基*皿中作为空白,每个 样品做三个重复。将其置于37℃下培养24h后,观察 各*板中菌体的生长情况,无菌生长的*板最低多 酚浓度即为该样品的最小抑菌浓度(MIC)。
2 结果与讨论
2.1 大孔树脂纯化前后含量比较

2012年第22期 169

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mV VcEAC(mg/L)

由表1可知,超高压提取石榴皮多酚的提取得率

高达26.21%;大孔树脂纯化前后石榴皮总酚含量差

异显著,纯化后含量提高一倍,说明大孔树脂是一种

非常有效的纯化方法。

表1 超高压提取总酚得率与不同纯度总酚含量(%)

Table 1 Yield of total polyphenol by UHPP extract and

contents of different purity quotients(%)

提取方法 提取得率 粗提物多酚含量 纯化物多酚含量

超高压提取 26.21±0.11 36.76±0.21

77.40±0.48

2.2 HPLC含量测定
2.2.1 混合标样标准图谱 图1说明,在1.2.4.3所指 定的色谱条件下,混合标样中八种酚类标样达到了 基线分离,效果良好。

2

1 100

56

7

23

4

0 10

8

20

30

40

50

min

图1 混合标样色谱图

Fig.1 Chromatogram of mixed standard samples

注:1:没食子酸;2:安石榴苷;3:原儿茶酸;4:儿茶素;

5:绿原酸;6:咖啡酸;7:阿魏酸;8:鞣花酸。

2.2.2 回归方程、相关系数及保留时间的确定 配 制一系列不同浓度的标样混合溶液(n=5),根据不同 组分的峰面积与其含量的线性关系,利用外标法建 立标准曲线,进行线性回归,得到不同标样的回归方 程和相关系数,如表2中所示。表2说明,在1.2.4.3所 指定的色谱条件下,在相应的线性范围内,相关系数 (R2)均大于0.99,线性关系良好。

表2 酚类物质的回归方程和保留时间

Table 2 Regression equation and retention time of polyphenols

酚类名称 没食子酸 安石榴苷 原儿茶酸
儿茶素 绿原酸 咖啡酸 阿魏酸 鞣花酸

回归方程 相关系数(R2) 保留时间(min)

y=78471x-14584 0.9995

9.054

y=31989x-69587 0.9978 10.820、15.337

y=39513x-9906 0.9998

14.108

y=18024x-14600 0.9991

20.946

y=36256x-1927 0.9998

25.14

y=85357x-46922 0.9991

28.084

y=62966x-12083 0.9996

40.012

y=38660x-34554 0.9994

48.052

2.2.3 大孔树脂纯化前后各组分含量的比较 将石 榴皮提取物和纯化物在已确定的色谱条件下进行测 定,并根据所得图谱中不同峰的保留时间,按照不同 标样方程,计算出各待测液中多酚组分的种类和含 量结果见表3。
由表3可以看出,大孔树脂处理前后,不同提取 物多酚物质种类并无明显变化,但纯化使它们含量 提高一倍左右;对照标品图谱,可以确定粗提物中安 石榴苷含量高达198.76mg/g,纯化物中安石榴苷含量

高达403.47mg/g,均约占总酚含量的55%,其次还含 有没食子酸、原儿茶酸、儿茶素、鞣花酸等。

表3 粗提物与纯化物多酚组成成分的定量分析(mg/g) Table 3 Quantitative analysis of polyphenols compounds in
crude extract and resin purification(mg/g) 提取方法 没食子酸 安石榴苷 原儿茶酸 儿茶素 鞣花酸
粗提物 5.99 198.76 17.20 70.02 5.99 纯化物 10.60 403.47 32.94 144.63 9.04 注:绿原酸、咖啡酸和阿魏酸在样品中未能检出。

2.3 不同极性多酚得率与总酚含量比较
按照1.2.5方法对大孔树脂纯化后的提取物进行 有机溶剂分级萃取的萃取得率及各分级物的总分含 量见表4。

表4 有机溶剂萃取后不同极性多酚得率与总酚含量(%)

Table 4 Yield and total polyphenol content of

different polarities after organic solvent extrac(t %)

指标

乙酸乙酯相

正丁醇相

水相

萃取得率 总酚含量

21.5 76.39

55.28 83.07

23.22 70.30

由表4可知,有机溶剂分级萃取能将超高压提取 的石榴皮多酚纯化物进行很好分离。正丁醇相的萃 取得率最高达到55.28%,显著高于乙酸乙酯相和水 相的;不同相分级产物的总酚含量的高低顺序为:正 丁醇相>乙酸乙酯相>水相。
2.4 不同样品的抗氧化活性测定
2.4.1 清除DPPH·的能力 DPPH·是一种以氮为中 心的极其稳定自由基,常用它的研究物质的抗氧化 能力,方法简便,并可长期保存。图2显示了不同样品 对DPPH·的清除能力。

25

20

b

a c

15

d

10 e
5

0

PCE

RPE

WtP

EaP

NbP

图2 不同样品对DPPH·的清除能力

Fig.2 Scavenging ability of different samples on DPPH free radical

注:PCE:超高压粗提物;SCE:超声波粗提物;TCE:热回流粗

提物;RPE:超高压提取后的大孔树脂纯化物;EaP:乙酸乙酯

相萃取物;WtP:水相萃取物;NbP:正丁醇相萃取物;标有不同

字母的组别表示彼此间有显著性差异,p<0.05;图3、图4同。

图2显示,EaP清除DPPH·的能力最高,其VC当量 浓度为18.597mg/L,显著高于NbP(16.12mg/L)和WtP (13.25mg/L)(p<0.05),三者的清除能力均高于VC,也 均显著高于PCE;随着极性增大,多酚清除DPPH·的 能力降低;所有样品清除DPPH·效果的强弱顺序为: EaP>RPE>NbP>WtP>PCE。 2.4.2 清除羟基自由基的能力 羟基自由基活性很 强,是目前所知各种活性氧中对生物体毒性最强、危 害最大的一种自由基。浓度为200mg/L的石榴皮多酚

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提取物、纯化物和分级物对它的清除效果见图3。

VcEAC(mg/L)

250

a 200

a

b

c 150 d

100

50

0

PCE

RPE

WtP

EaP

NbP

图3 不同样品对羟基自由基的清除能力

Fig.3 Scavenging ability of different samples on

hydroxyl free radical

图3显示,不同样品清除羟基自由基的能力存在 显著性差异,即EaP(190.25 mg/L)>NbP(177.22mg/L) >WtP(150.69mg/L);RPE显著高于PCE的清除能力; 各样品的羟基自由基清除能力的大小顺序为RPE> EaP>NbP>WtP>PCE。
2.5 不同样品的抑菌活性测定
2.5.1 抑菌圈的直径 不同样品对金黄色葡萄球菌 的抑菌圈直径如图4所示。

抑菌圈直径(mm)

20

19

a

a

18 b

17

b

16 c

15

14

PCE

RPE

WtP

EaP

NbP

图4 不同样品抑菌圈直径的比较

Fig.4 Comparison of antimicrobial diameter of different samples

由图4可知,在大孔树脂纯化前后,抑菌活性具 有显著性差异,RPE的抑菌圈直径为18.44mm,显著 高于PCE的15.68mm,表明大孔树脂纯化可以提高超 高压提取物的抑菌性能。样品经有机溶剂萃取分级 产物间的抑菌活性呈现一定差异,其中NbP(正丁醇 相)最 高 ,多 酚 浓 度 为 2.5mg/mL 时 的 抑 菌 圈 直 径 达 到了18.13mm,显著高于 WtP(水相)和EaP(乙酸乙 酯相)。 2.5.2 最小抑菌浓度(MIC) 不同样品MIC的测定 结果见表5。
表5说明,大孔树脂纯化可以有效提高石榴皮超

表5 不同样品最小抑菌浓度的比较 Fig.5 Comparison of minimal inhibitory concentration of
different samples

样品

浓度(mg/mL)

10 5 2.5 1.25 0.625 0.312 0.156

PCE - - -

+

++ +++ +++

RPE - - -

-

+

++ +++

WtP - - -

-

+

++ +++

EaP - - -

+

+

++ +++

NbP - - -

-

-

+

++

注:“-”:无菌生长;“+”:菌体较少;“++”:菌体较多;“+++”:菌 体很多。

高压提取物的抑菌性能,最小抑菌浓度降低了一倍, 这与抑菌圈直径的测定结果一致。不同极性组分的 MIC 存 在 一 定 差 异 ,其 中 NbP 抑 菌 效 果 最 好 ,MIC 为 0.625mg/mL,优于WtP的1.25mg/mL和EaP的2.5mg/mL。 对于WtP和EaP的抑菌效果而言,MIC研究与抑菌圈 研究结果不一致,原因可能是抑菌效果的高低与总 酚含量和多酚组分的极性都有关,极性越大,抑菌性 能越高。
本研究结果显示,石榴皮多酚的超高压提取率 达到了26.21%,显著高于孙兰萍等使用热回流提取 得到的16.28%[7],除了工艺效应外,其原因可能还与 所使用的石榴皮品种不同有关,这提示在对石榴皮 多酚进行提取的研究中,应当注重石榴皮品种的选 择;该提取率也高于李国秀等 采 [18] 用超声波辅助提 取法的23.68%;并且超高压提取时间很短;所以采用 超高压技术提取石榴皮多酚具有一定优势。
不同极性的石榴皮多酚分级物的抗氧化活性和 抑菌性能不同,这两种功能的强弱均由总酚含量和 极性大小共同决定,总酚含量越大,极性越小其抗氧 化能力越强,这与张茜等[19]的研究结论一致;总酚含 量和酚类物质的极性均越大时,抑菌活性越强,这与 乔树华[20]的研究结果一致。
3 结论
3.1 大孔树脂纯化可有效提高超高压提取物的多
酚纯度和各组分的含量,经大孔树脂纯化后超高压 提取物的多酚含量达到了77.40%,且抗氧化活性和 抑菌性能均有显著提高;HPLC测定结果显示大孔树 脂纯化并未改变石榴皮多酚的组成。
3.2 有机溶剂分级萃取法能有效分离石榴皮多酚,
正丁醇相的萃取得率达到了55.28%左右;各相萃取物 中多酚含量的排序为:正丁醇相>乙酸乙酯相>水相。
3.3 超高压提取物中不同极性的多酚组分的抗氧
化活性差异显著,其强弱顺序为乙酸乙酯相>正丁醇 相>水相;而在抑菌性能方面,正丁醇相的活性最高, 显著高于水相和乙酸乙酯相。
参考文献
[1] 张军. 石榴[M]. 西安:陕西科学技术出版社,1989. [2] 王爱伟,孟繁锡,刘春鸽,等. 我国石榴产业现状、发展对策 及前景分析[J]. 中国果业信息,2006,23(6):6-8. [3] Julie Jurenka, M T. Therapeutic Applications of Pomegranate (Punica granatum L.):A Review[J]. Altern Med,2008,13 (2): 128-144. [4] Zahin M, Aqil F, Ahmad I. Broad spectrum antimutagenic activity of antioxidant active fraction of Punica granatum L. peel extract [J]. Mutation Research/Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis,2010,703(2):99-107. [5] 宋立江,狄宝,石碧. 植物多酚研究与利用的意义及发展趋 势[J]. 化学进展,2000,12(2):161-170. [6] Al -MAIMAN S A, AHMAD D. Changes in physical and chemical properties during pomegranate (Punica granatum L. ) fruit maturation[J]. Food Chemistry,2002,76:437-441.
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是因为源于果实的醛类物质在有氧条件下通过脂氧 合 酶 的 作 用 转 化 为 醇 或 酸 类 [21],这 有 利 于 葡 萄 酒 生 青气味的减少。
3 结论
3.1 霞多丽葡萄中初步分离定性36种化合物,包括
10种醇类,7种酯类,5种萜烯类,5种有机酸类,7种羰 基化合物,2种烃类。苦水玫瑰花中初步分离定性59 种化合物,包括4种醇类,7种酯类,25种萜烯类,2种 有机酸类,13种羰基化合物,6种烃类。霞多丽玫瑰 酒中初步分离定性56种化合物,包括12种醇类,21种 酯类,9种萜烯类,8种有机酸类,2种羰基化合物,1种 烃类。
3.2 霞多丽葡萄、苦水玫瑰花、霞多丽玫瑰酒中共
有香气组分10种,其中苯甲醇、β-香茅醇主要源自苦 水玫瑰花。霞多丽玫瑰酒与苦水玫瑰花共有7种香气 组分,多为萜烯类及其相应酯类,以苦水玫瑰花特征 香气物质为主。霞多丽玫瑰酒与葡萄共有香气组分 12种,多为霞多丽葡萄酒特征香气组分。
3.3 添加苦水玫瑰花使得霞多丽玫瑰酒中玫瑰特
征香气组分萜烯及其相应酯类大幅增加,有助于提 高酒的花香品质。
参考文献
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2012年第22期 177


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